ПЦР: что это?
ПЦР-диагностика — это анализ на инфекции. Для начала позвольте расшифровать этот термин: аббревиатура ПЦР означает полимеразная цепная реакция. Не думаю, что после этого вам сразу стало все понятно. Вот для этого, собственно, и пишется данная статья. Значение точной постановки диагноза в медицинских учреждениях трудно преувеличить. Буквально с каждым годом методы диагностики становятся все более продвинутыми и высокотехнологичными. И в эту прогрессивную «струю» очень органично вписывается метод ПЦР-диагностики, часто использующийся в лабораторных исследованиях. Популярность ПЦР во многом базируется на широте его использования: он применяется для идентификации множества инфекционных заболеваний. Кроме этого, он весьма удобен для использования в качестве «экзаменатора» для врача, проверяющего эффективность назначенного им лечения.

Уникальность живых организмов предопределяется составом генетического материала каждой особи. Гены — небольшие участки молекулы ДНК — представляют собой своеобразный «паспорт» каждого организма. Каждый вид патогенных бактерий и вирусов также имеют свою неповторимую последовательность и комбинацию нуклеотидов (это те «кирпичики», из которых построена ДНК). Чтобы было еще понятнее, нуклеотид — это структурная единица ДНК первого порядка. Ген, в свою очередь, представлен определенной последовательностью нескольких нуклеотидов, что в целом складывается в большую молекулу ДНК.

Для определения возбудителя заболевания у человека производится забор биологического материала: мочи, крови, слюны - или делается мазок со слизистых оболочек. Если человек болен, то в биологическом материале будет содержаться ДНК возбудителя заболевания. Но вся загвоздка в том, что этого материала ничтожно мало для постановки диагноза. Вот тут и приходит на помощь метод ПЦР-диагностики. Он позволяет увеличить количество генного содержимого, принадлежащего конкретному микроорганизму, чтобы его можно было с уверенностью идентифицировать. То есть, если уж очень упрощенно, то метод ПЦР состоит из трех этапов:

• забор материала,
• копирование ДНК для того, чтобы можно было определить ее обладателя,
• идентификация возбудителя заболевания.

Как происходит исследование методом ПЦР
Как уже было сказано, на первом этапе пациент «сдает» биологический материал. К вышеперечисленному добавим спинномозговую жидкость, содержимое полостей тела и раневое отделяемое (тип материала используется в зависимости от обстоятельств). Биоматериал собирается одноразовыми приспособлениями, а затем заключается в стерильные пластиковые контейнеры (или помещается на специальные питательные среды), чтобы быть транспортированным в лабораторию.
По прибытии к пункту назначения биопроба с предварительно добавленным в нее реагентом помещается в термостат, где протекает полимеразная цепная реакция, состоящая из 30-50 циклов. На один цикл требуется от 2 до 3 минут, следовательно, на все отводится 2-3 часа.
Затем переходят к самому важному — этапу идентификации. С помощью электрофореза полученные с помощью ПЦР нити ДНК дифференцируют по размерам. По длине ДНК и судят об ее обладателе: вирусе или бактерии.

Чем хорош метод ПЦР?
Когда говорят «ПЦР», подразумевают «высокую чувствительность», составляющую в разных случаях от 95 до 100%. Но она свойственна данному методу не по умолчанию, а лишь при обязательном соблюдении ряда условий:

• следует правильно собрать и транспортировать биопробу в лабораторию;
• инструментарий, используемый для забора материала, должен быть стерильным и одноразовым;
• анализ проводить строго по методике и в условиях асептики;
• персонал лаборатории должен быть не после фельдшерского техникума, а иметь высокую квалификацию.

Чувствительность метода ПЦР может немного колебаться в зависимости от объекта поиска. Например, уреаплазма определяется с более высокой (99-100%) точностью, чем вирусный гепатит С (97-98%), что само по себе, в сравнении с иными методами диагностики, тоже весьма неплохо.
Полимеразная цепная реакция — очень видоспецифичный, селективный метод: он позволяет сделать вывод о наличии в биопробе конкретного микроорганизма, а не его ближайшего родственника.

Не следует выделять ПЦР из сонма других методов диагностики как единственно верный и правильный путь. Он прекрасно уживается и сочетается с другими методами, такими как иммуноферментный анализ, прямая иммунофлуоресценция и т.д. Все отдается на откуп сотрудникам медицинских учреждений .

Что можно определить при помощи ПЦР
Перечислим наиболее часто встречаемые возбудители инфекционных заболеваний, выявляемые методом ПЦР-диагностики. Правда, это далеко не весь список.

Бактерии

• хламидии, вызывающие такую распространенную урогенитальную патологию, как хламидиоз;
• микобактерии, вызывающие разные формы туберкулеза, лепру (проказу);
• легионеллы, с которыми связана так называемая «болезнь легионеров» (не римских, а представителей Американского легиона ветеранов, после съезда которых в 1976 году была впервые зафиксирована вспышка легионеллёза);
• сальмонеллы, вызывающие брюшной тиф и сальмонеллез;
• бледные трепонемы - именно они являются возбудителем сифилиса;
• клостридии, отдельные патогенные виды которых вызывают ботулизм, столбняк и газовую гангрену. Да и те виды клостридий, которые являются представителями нормальной кишечной микрофлоры, также способны навредить: при определенных обстоятельствах они вызывают диареи и колиты;
• холерные вибрионы;
• патогенные виды «эшерихии коли» или, говоря по-русски, кишечной палочки. Они вызывают кишечные заболевания, объединенные под названием эшерихиозы, протекающие в виде острых пищевых отравлений;
• золотистые стафилококки, чья патогенность проявляется широчайшим спектром заболеваний, начиная от угрей с фурункулами и заканчивая пневмонией и менингитом;
• риккетсии, вызывающие сыпной тиф;
• хеликобактер пилори, чья деятельность в организме человека способна вызвать желудочные и кишечные язвы, гастриты;
• уреаплазмы, гонококки (уреаплазмоз и гонорея).

Вирусы

• ретровирусы, наиболее известным из которых стал вирус иммунодефицита человека — ВИЧ;
• вирусы герпеса;
• вирус Эпштейна-Барра, основной «грех» которого — инфекционный мононуклеоз;
• цитомегаловирус, вызывающий инфекцию, по своим проявлениям сходную с мононуклеозом;
• вирусы гепатита;
• вирусы краснухи;
• вирус папилломы человека;
• рино- и аденовирусы, вызывающие острые респираторные заболевания.

Источник: http://www.webmedinfo.ru